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核酸检测类产品问答
发布者:handler 发布日期:2020-01-06

核酸检测类产品

 

1.目前“牧康灵”检测相关产品有哪几大类?

答:目前我们有三大类检测产品:一是核酸类产品,包括荧光定量PCR检测配套产品;二是病毒抗原(蛋白)类检测产品,包括常见猪病的胶体金抗原快速检测卡;三是猪健康体检类产品,包括猪的寒度检测试剂盒、朊度检测试剂盒和活度检测试剂盒等。

 

2.牧康灵核酸检测类产品的优势?

答:核酸检测包括核酸提取和PCR反应两个步骤,所以包括两种试剂盒。

其中核酸提取试剂盒我们更专业,特别是针对非洲猪瘟病毒检测,养殖场对于临床唾液样本采集和环境监测的特殊要求,我们开发了高效准确的唾液样本核酸提取试剂盒和环境样本核酸提取试剂盒,通过实验对比验证,这两种提取盒的效率是普通试剂盒提取量的10倍以上。

其次是荧光定量PCR检测试剂盒,通过实验室对比检测,我们PCR试剂盒的灵敏度不仅检测血液样本灵敏度是100%,而且检测唾液和环境样本灵敏度也高达100%,对于猪场精准检测,精准清除具有更好的指导意义。

 

3.非瘟检测猪唾液样本为何要用唾液专用核酸提取盒,普通提取试剂盒不能提取吗?

中国动物疫病预防控制中心发布的第二批非洲猪瘟现场快速检测试剂名单,包括26个企业的34个产品。但是实验室测评和筛选产品时,检测样品类型仅限于猪血液和猪组织样品。但是猪场在非瘟形势下想存活下来,要靠早期监测生物安全防控效果,用的样本大多是猪的唾液和环境物质,非瘟病毒含量低,并且不同样本的核酸含量、酶含量、特殊杂质含量都不一样。所以说,目前不配套核酸提取试剂盒,仅含有核酸提取液的非洲猪瘟病毒荧光PCR快速检测试剂盒或提取效率低的核酸提取试剂盒并不能满足猪场的临床检测需求。

4.唾液样本有何特殊性?

答:首先,唾液样本中含有丰富的酶类物质:有溶菌酶、唾液淀粉酶、过氧化物酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、丙酮酸激酶、谷胱甘肽还原酶等,大量酶类物质会对病毒的核酸有一定的降解作用。其次,唾液样本病毒含量本身较低,提取效率不高的试剂盒直接影响检出率。

 

5.唾液样本核酸提取盒专门用于提取唾液,那血液或其他样本可以提取吗?

答:唾液样本核酸提取试剂盒适用于从唾液样本中提取基因组DNA。试剂盒采用独特的裂解液和缓冲液系统,配合高效吸附DNA的吸附膜,在一定条件下对唾液中含量不多的DNA具有极强的吸附富集能力,当条件改变时又可以可逆地释放DNA,从而达到快速分离纯化DNA、并最大限度地去除蛋白质等杂质的目的,从而保证提取核酸的纯度。

其他血液和拭子样本也可以用该试剂盒提取,但相对而言,该试剂盒更适用于唾液样本。

血液样本可用普通核酸提取试剂盒即可,其他简单的拭子样本也可用该试剂盒提取,但若是样本类型复杂、含杂质较多,建议用环境样本核酸提取试剂盒高效提取。

 

6、针对唾液样本中非洲猪瘟病毒的检测,怎样检测更灵敏?

答:首先唾液样本检测要用专门的唾液样本核酸提取试剂盒来提取病毒核酸,这样能更精确的抓住唾液样本中少量的病毒核酸,便于下一步扩增检测。其次,PCR检测要选用高度灵敏的反应试剂盒,普通检测血液样本的PCR试剂盒还不能满足唾液样本中低浓度核酸的检出。所以两种试剂盒是配套,是检出唾液样本中非洲猪瘟病毒的关键。

 

7.环境样本核酸提取试剂盒主要针对什么类型的样本?

答:环境样本核酸提取试剂盒是专为环境样本DNA提取而设计的,适合从各种环境如猪场土壤、底泥、漏缝地板以及各种动物粪便、尿液,猪舍内外地面、墙面,运输车辆各部位和人员头发、衣物等处采集样本,采用棉拭子蘸取足量此类样品,从中提取高产量、高纯度的核酸DNA。

 

8.环境样本核酸提取试剂盒效果与普通核酸提取步骤有何不同?

产品试剂组成除了有传统的裂解液、洗液和洗脱液,还针对环境样本的复杂性和特殊性,增加了干珠管、S2增强裂解液、S3-腐殖酸吸附剂和S4-结合液,其中干珠管可以更好的分散样本,让样本与裂解液充分接触和裂解,S3吸附剂可选择性吸附DNA样品中的腐殖酸等抑制因子,提高DNA纯度,检出效率更高。增加了试剂从而增加了处理步骤,但最终提取的核酸效率是普通提取盒的10-100倍。

 

9.唾液和环境样本核酸提取试剂盒的洗液在使用前都要加相应体积的无水乙醇吗?

答:是的。每个新提取盒第一次使用前,在两种洗液里面都要按说明书加入相应体积的无水乙醇才能使用。无水乙醇属于易燃易爆化学试剂,所以不能直接放在试剂盒里运输,需要使用单位自行购买准备。如果不能购买到实验室用的无水乙醇,可用医用的95%酒精代替,但注意不要购买还其他复方成分的95%酒精,一定是单一成分的酒精。

 

10.非洲猪瘟病毒检测有哪些检测产品可供选择?

答:目前非洲猪瘟检测有胶体金快速检测卡和荧光定量PCR检测试剂盒两种。

胶体金快速检测卡优点是操作简单,检测快速,缺点是准确度只有60-70%,且仅适用于发病猪的血液样本检测。

猪场早期监控和生物安全防控检测都需要用灵敏度高的荧光定量PCR检测试剂盒,样本最好是无创采集猪唾液样本进行检测。

除了PCR反应盒要选择高度灵敏的检测试剂盒,核酸提取步骤也要用唾液和环境样本专用核酸提取试剂盒。这样全面配套,才能保证检测结果的准确性,发挥猪场早期检测的精准监控作用。

 

11.PCR检测对基层猪场的实验环境条件有何要求?

答:基层猪场PCR实验室按照专业PCR检测实验室标准来建设成本太高,可通过划分区域,通风换气和消毒清洁等方法来保障实验室检测工作的正常运行。

建议猪场检测实验室至少分三个区域:一是样本处理区,用来做样本前处理和核酸提取;二是试剂配制区,用来配制和分装PCR反应液,添加核酸模板等;三是PCR 扩增区,用来上机检测,观测结果。各工作区要有一定的物理隔离,如隔板、房间、超净工作台等。各区的移液枪、吸头、离心管等实验用品要专区专用,不能交叉混用。实验人员进入不同区域操作时最好更换衣服和手套,防止交叉污染。

 

12. PCR实验室各区功能及主要设备有哪些?

答:样品制备区:主要进行样品的收集、保存和核酸提取,本区主要设备有冰箱,离心机,水浴锅、涡旋振荡器、移液枪等。试剂耗材包括核酸提取试剂盒、采样棉签、唾液采集包、5ml、1.5/2ml离心管、1.5ml离心管架、大中小号枪头、生理盐水、无水乙醇或者95%酒精、一次性手套、口罩等。

试剂配制区主要进行PCR反应液的配制和加样,本区主要设备有冰箱、掌上离心机、移液枪等,主要试剂耗材包括PCR反应管、PCR荧光检测试剂盒、PCR管板架、75%酒精棉球等。

PCR扩增区:PCR仪上机检测。本区主要设备有电脑、荧光PCR检测仪等。

以上仪器、试剂和耗材可在本公司一站式配齐,无需额外购买。

 

13.PCR实验室常用的消毒剂是那种?

答:PCR实验过程要认真细心操作,避免动作幅度过大,引起核酸形成气溶胶污染实验室。每次实验完毕后用10%次氯酸或 75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器,及时清理实验产生的生物垃圾,最好无害化处理或者在空旷地方烧毁。

 

14.PCR检测试剂盒需-20度保存,每次使用前融化,这样反复冻融会影响检测结果吗?

答:PCR检测试剂盒平时要保存在-20度冰箱,用前放在室温或4度冰箱融化。由于反应液中的酶和荧光物质等对温度敏感,建议反复使用的次数不能超过5次,最好3次左右用完。

 

15.通常提取试剂盒都在室温条件下保存,里面的蛋白酶K也放在室温可以吗?

答:蛋白酶K需按照试剂盒说明书要求保存在2-8度或者-20度,不能跟提取盒的其他试剂一起放在常温,这样会大大影响酶的活性。所以建议蛋白酶K应按照说明书要求在低温条件单独存放和运输。